Народные средства лечения ревматоидного артрита коленного сустава

Avian influenza A H7N9 virus infections not evident among high-risk groups in India
Источник: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5433291/

Сэр,

Появление нового вируса гриппа A (H7N9) птичьего происхождения в Восточном Китае вызвало тревожную ситуацию из-за серьезных инфекций нижних дыхательных путей у людей. По состоянию на январь 2015 года сообщалось о 486 людских инфекциях H7N9 (в результате которых погибло 185 человек). Инфекции человека вирусом H7N9 были связаны с заражением домашней птицы на рынках живых птиц, хотя вирус H7N9 нелегко передается людям1. В сценарии появления вирусов птичьего гриппа (АИ) в Азии необходимо отслеживать группы населения с высоким уровнем риска, такие как работники птичьего гриппа для людей. В Индии вспышки высокопатогенного вируса AI H5N1 были впервые зарегистрированы в феврале 2006 года у домашней птицы в Навапуре, Махараштра, а затем в северо-восточной Индии было зарегистрировано несколько вспышек. Учитывая близость северо-восточных районов Индии с Китаем и вероятность введения этого вируса, настоящее исследование было проведено для выявления вирусных инфекций AI H7N9 среди работников птицеводства в качестве группы высокого риска в западной и северо-восточной Индии в течение 2014 года.

Наблюдение за вирусными инфекциями AI H7N9 среди работников птицеводства, работающих на рынках живой птицы и фермерских хозяйств в Пуне (Западная Индия), Западной Бенгалии и Ассам (северо-восточная Индия), планировалось и выполнялось с одобрения и поддержки местного муниципального и государственного здравоохранения Отделы. Исследование было также одобрено Институциональным комитетом по этике человека ICMR-Национального института вирусологии в Пуне в соответствии с руководящими принципами, установленными Индийским советом медицинских исследований для исследований по человеческим предметам4. Письменное информированное согласие было получено от отдельных участников исследования. Участники исследования были проинтервьюированы о ранее существовавших коморбидных заболеваниях, состояниях здоровья или болезнях в недавнем прошлом (последние шесть месяцев), текущем или рутинном характере работы и любых других заданиях на работу аналогичного или родственного характера.

Предположение о распространенности

В течение января-ноября 2014 года в исследование было зачислено 540 работников птицеводства. Образцы были собраны из муниципальных образований Pimpri-Chinchwad и муниципальных образований Пуны в Пуне; Силигури, Алипурдуар, Дупгури-Джалпаигури, Калимпонг-Дарджилинг, Западная Бенгалия и Дибругарх, Ассам. Образцы крови (3-5 мл) собирали у 540 работников домашней птицы путем венопункции и сыворотку отделяли и хранили при -20 ° С до испытания (таблица). Образцы сыворотки тестировали с помощью анализа ингибирования гемагглютинации (HI) и микронейтрализации (MN) в соответствии с рекомендованными ВОЗ протоколами для обнаружения антител против вируса H7N91011. HI-анализ проводили с использованием 1 процента эритроцитов лошади. В исследовании использовался контрольный вирус H7N9 A / Shanghai / 2/13 (H7N9) -PR8, V-VIE2 ID-CDC-RG-32A из CDC, Атланта, США. В общей сложности 31 пробы горла и носового тампона были собраны у индивидуумов с ILI и были протестированы на наличие вируса гриппа A с использованием цепной реакции обратной транскрипционной полимеразы в реальном времени (qRT-PCR) в соответствии с протоколом, рекомендованным CDC, USA12. РНКаза Р и РНК из известного положительного образца служили положительным контролем. В качестве отрицательного контроля служила вода без нуклеаза.

Подробная информация о коллекциях образцов из разных государств в Индии в 2014 году

Работники птицеводства были лицами, занимающимися обработкой, транспортировкой, уборкой и убоем домашней птицы на рынках живой птицы, в магазинах или на фермах. Возрастная группа работников домашней птицы варьировалась от 15-79 лет, медиана 30 лет (среднее 32, стандартное отклонение 11,86). Соотношение между мужчинами и женщинами составляло 14. Только 6,5% были женщинами, поскольку работники домашней птицы были преимущественно мужчинами.

Не сообщалось о скоплениях тяжелых ОРИ (SARI) или отдельных случаев SARI. В общей сложности 31 работники птицеводства сообщили об ИЖ во время исследования; однако все образцы были отрицательными для присутствия вируса гриппа A в режиме RT-PCR в реальном времени. Все образцы сыворотки были отрицательными для присутствия антител против вируса H7N9 с помощью анализа HI и MN с использованием ≥80 титра13. Никаких симптоматических или бессимптомных человеческих инфекций H7N9 не было обнаружено среди профессиональных групп высокого риска для работников домашней птицы, занятых на рынках живой птицы и фермерских хозяйств.

Результаты сероэпидемиологического исследования на вирусы AI H5, H7 и H9 были зарегистрированы Xiong et al5 в городской популяции в Китае. Авторы оценили предшествующую или преходящую бессимптомную и умеренную инфекцию вирусов AI в общей популяции. Анализ HI использовался для определения уровней антител в образцах сыворотки человека. В исследовании сообщается об отсутствии антител против вируса H5N1 и низких уровнях антител к вирусу H7N9. Более ранние исследования из Китая показали низкий уровень антител к вирусам H5 и H7 в группах высокого риска67. Инь и др. 13 сообщили об отсутствии данных о заражении человека вирусом H7N9 у ветеринаров в Китае с использованием HA-специфических анализов ELISA и HI.

Наше раннее исследование ретроспективно проанализированных образцов от домашних работников и населения в Пуне показало отсутствие вируса H7N914. Настоящее исследование также подтвердило отсутствие контакта с вирусом H7N9 среди людей с высоким уровнем риска в западной и северо-восточной Индии. Ограничение настоящего исследования состояло в том, что исследование проводилось в течение ограниченного периода времени. Учитывая продолжающуюся передачу вируса H7N9 в Азии, было рекомендовано отслеживать и исследовать кластеры SARI или отдельные случаи SARI среди путешественников из затронутых стран15. Сильными сторонами настоящего исследования были включение людей с высоким уровнем риска по профессии, клиническое наблюдение, а также серологическое наблюдение и применение анализов MN. Демографические характеристики исследования населения были схожими. Однако исследовательская группа представляла более высокий риск заражения, чем ветеринары, из-за условий работы и практики работников домашней птицы.

В заключение, появление в Китае нового вируса гриппа A H7N9 вируса птичьего гриппа вызвало обеспокоенность в соседних странах. Однако ограниченный эпиднадзор за вирусом H7N9, проведенный среди работников птицеводства как группа высокого риска в западной и северо-восточной Индии, показал отсутствие вирусных инфекций H7N9 в течение 2014 года.

Авторы благодарят д-ра D.T. Mourya, директора ICMR-National Institute of Virology, Пуне, за поддержку; Д-р Рубен Донис, Отдел гриппа, CDC, Атланта, США, за предоставление вируса H7N9; Д-р A.R. Deoshatawar, R.H. Jagtap, NIV, Pune; Д-р Swarup Bakshi, Shweta Mandal, Rajheswar Singh, M.K. Golder, отдел ARD для полевых работ; Д-р Biswa Ranjan Satpati, директор, д-р Kamalakanti Pati, Jt. Директор службы здравоохранения и государственных медицинских работников, правительство Западной Бенгалии; Санитарным чиновникам, Пуне и муниципальной корпорации Pimpri-Chichwad для получения разрешения и поддержки. Исследование было частично профинансировано Индийским советом медицинских исследований, правительством Индии и дополнительным финансированием из CDC, Атланта, США, в соответствии с Соглашением № 5U51IP000333CDC.

Конфликт интересов: нет.

Avian Influenza H9N2 Seroprevalence among Poultry Workers in Pune, India, 2010
Источник: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3356154/

Задуманные и разработанные эксперименты: SDP BVT CGR ACM. Выполнены эксперименты: SSP TDB SSK SDP. Проанализированы данные: SDP BVT CGR YKG. Используемые реагенты / материалы / инструменты анализа: SDP BVT. Написал документ: SDP BVT CGR YKG ACM.

Птичий грипп (AI) H9N2 был зарегистрирован у птицы в Индии. Сероэпидемиологическое исследование было проведено среди работников птицеводства, чтобы понять распространенность антител против AI H9N2 в Пуне, Махараштра, Индия. Было отобрано в общей сложности 338 работников птицеводства. Образцы сыворотки испытывали на наличие антител против вируса AI H9N2 с помощью анализа ингибирования гемагглютинации (HI) и микронейтрализации (MN). В общей сложности 249 исходных сывороток из общей популяции из Пуны были протестированы на антитела против AI H9N2 и были отрицательными с помощью HI-анализа с использованием титра титра антител ≥40. В целом, 21 субъект (21/338 = 6,2%) был положительным для антител против AI H9N2 с помощью либо HI, либо MN-анализов с использованием титра титанового титанового антитела ≥40. В общей сложности 4,7% и 3,8% работников домашней птицы были положительными для антител против AI H9N2 с помощью анализа HI и MN, соответственно, используя 40 в качестве титров отключаемого антитела. Это первый отчет о серопревалентности антител против AI H9N2 среди работников птицеводства в Индии.

Вирусы гриппа относятся к семейству Orthomyxoviridae. Вирусы гриппа имеют сегментированные однонитевые вирусы с отрицательным чувством РНК и классифицируются по типам A, B и C. Они делятся на подтипы, основанные на серогруппировании 16 гена гемагглютинина (HA) и 9 нейраминидазы (NA). У диких птиц обнаружено по меньшей мере 103 из возможных комбинаций HA-NA вируса гриппа типа A типа A.

Вирус птичьего гриппа (AI) H9N2 является низкопатогенным вирусом с широко распространенным распространением у домашней птицы в Азии [1]. В Азии вирусы AI H9N2 регулярно изолированы от уток [2]. Однако в течение последней половины последнего десятилетия вирусы H9N2 вызвали вспышки болезней у наземной птицы во многих частях мира [3]. Сообщалось, что вирусы AI H9N2 приобрели характеристики связывания с рецепторами, характерные для штаммов человека, увеличивая потенциал для повторного дозирования как в дыхательных путях человека, так и в свинах [4], [5]. У иммуносупрессивных цыплят вирус H9N2 вызывает тяжелые инфекции дыхательных путей с высокой смертностью у молодых цыплят и серьезным снижением производства яиц при укладке цыплят, что приводит к экономическим потерям. Этот вирус сохраняется у цыплят и распространяется на не затронутые стада через фекально-оральный путь, не проявляя значительных тяжелых клинических признаков [6]. Пересечение видового барьера млекопитающих подчеркивает пандемический потенциал вирусов AI H9N2.

Вирус AI H9N2 впервые был выделен у людей в Гонконге в 1999 году [7], что привело к опасениям, что вирус H9N2 может стать потенциальным кандидатом на пандемию, кроме вируса H5N1. В 2003 году человеческие случаи вируса H9N2 были зарегистрированы в Гонконге, хотя о смерти не сообщалось [8], [9]. Исследования показали, что птичий вирус H9N2, выделенный из цыплят, тесно связан с изолятом H9N2 человека из Гонконга [10]. Недавно сообщалось о человеческом случае AI H9N2 из Бангладеш в соседней стране Индии [1]. Эти события привели к серии сероэпидемиологических исследований во всем мире, которые показали серопревалентность AI H9N2 в диапазоне 1-6% в разных группах риска [11] — [13].

Сообщается о распространении вируса AI H9N2 на рынках живых птиц в Индии [14], [15]. Серопревалентность AI H9N2 также сообщалась в emus (Dromaius novaehollandiae) из Индии [16]. В этом сценарии важно проводить исследования взаимодействия человека с человеком в Индии. В настоящем исследовании сообщается о результатах сероэпидемиологического исследования AI H9N2 среди работников птицеводства в Пуне, Махараштра, Индия.

Птицефабрики и фермы были идентифицированы в городе Пуне и вокруг него, чтобы связаться с птицами для приглашения принять участие в исследовании. Образцы собирались с рынков влажной птицы и птицефабрик. Тип птиц, продаваемых на рынках птицы и фермерских хозяйств, был в основном цыплятами. Куры были либо цыплятами-бройлерами, либо цыплятами на заднем дворе. Приблизительно 50 птиц содержались в каждом магазине на рынках птицы, в то время как размер птицефабрик варьировался от 1000 до 10 000 цыплят. Эти рынки и фермы находились в городских, полугородских или сельских районах.

Письменное информированное согласие было получено от отдельных участников исследования. Форма информированного согласия включала информацию об исследовании, его актуальности, полезности и учебных процедурах, включая риски и выгоды. «Национальный институт вирусологического этического комитета по исследованиям в области человека» одобрил исследование. Участников исследования опросили и спросили о ранее существовавших сопутствующих болезнях / состояниях или болезнях в недавнем прошлом (6 месяцев), текущем / рутинном характере работы и любых других заданиях на работу аналогичного или родственного характера.

Работники птицеводства были лицами, занимающимися обработкой, транспортировкой, уборкой и убоем домашней птицы. Лицо, демонстрирующее присутствие антител против AI H9N2 с помощью анализа ингибирования гемагглютинации (HI) или микронейтрализации (MN), считалось серопозитивным. Поскольку нет опубликованного отчета о количестве работников птицеводства, работающих в Пуне, были предприняты попытки представлять население домашней птицы (рисунок 1). Поэтому было принято предположение о том, что для этого экспериментального исследования было принято 500 человек из птицы для расчета размера выборки. Предположение о распространенности 5% антител против вируса AI H9N2 было сделано на основе опубликованных отчетов аналогичных исследований, проведенных за пределами Индии [11] — [13]. Расчеты размера выборки выполнялись с использованием SSCPS версии 1001 (SPSS) [17]. В исследовании в июле-декабре 2010 года было зарегистрировано 338 работников птицеводства. Оценочный размер выборки составил 239 при условии 5% -ной распространенности, 95% -ной достоверности и точности 0,02% при двухстороннем тесте с конечной коррекцией популяции с размером популяции 500 для города Пуны. Образцы были собраны из 30 мест в городе Пуне и прилегающей территории. 2-3 мл образцов крови собирали путем венепункции, и сыворотку отделяли и хранили при -20 ° С до испытания. В общей сложности 249 исходных сывороток, собранных из общей популяции из Пуны, использовали для определения базового уровня антител против вируса AI H9N2.

Для выявления антител к гриппу с помощью ИИ и MN были использованы вирус гриппа A / Chicken / India / NIV / 99321/09 (H9N2), выделенный в Национальном институте вирусологии (NIV), Индия. Вирус распространен в аллантоидных полостях 10-дневных эмбриональных куриных яиц. Аллантоидную жидкость собирали через 48 часов после инфицирования. Вирус титровали анализом гемагглютинации (HA) с использованием 0,5% эритроцитов индейки (эритроцитов).

Для анализа HI все образцы сыворотки обрабатывали ферментом, разрушающим рецептор (Denka Seiken Co. Ltd., Chuo-ku, Tokyo, Japan) для удаления неспецифических ингибиторов. Образцы сыворотки, показывающие присутствие агглютининов, обрабатывали эритроцитами лошадей и индейки для удаления неспецифических агглютининов. Наличие неспецифических агглютининов было очевидным благодаря гемагглютинации эритроцитов сывороткой. Такие образцы сыворотки были адсорбированы индюкными эритроцитами. Один объем упакованных эритроцитов смешивали с 20 объемами обработанной RDE сывороткой и инкубировали при 37 ° С в течение 1 часа, центрифугировали при 1200 об / мин в течение 10 минут. Адсорбированную сыворотку осторожно удаляли, не нарушая упакованных клеток, и использовали в анализе HI. Анализы HI проводили с использованием 0,5% инсулиновых эритроцитов [18]. Поскольку контрольные значения отсечки как HI, так и MN-анализов для серологического наблюдения AI H9N2 у людей недоступны, результаты анализов HI и MN были зарегистрированы с использованием титров с титрами ≥40, ≥80 и ≥ 160 антител.

Анализ MN проводили с клетками почки Madin-Darby (MDCK), полученными в Центрах по контролю и профилактике заболеваний (CDC), Атланта, США. Клетки использовали в течение максимум 25 проходов и поддерживали в модифицированной Дульбекко среде Eagle (DMEM), содержащей 10% фетальной бычьей сыворотки (Gibco®, Grand Island, NY, USA), 2 мМ L-глутамина и антибиотиков пенициллина и стрептомицина. 50% -ную инфекционную дозу культуральной ткани (TCID50) вируса H9N2 определяли титрованием в клетках MDCK. TCID50 рассчитывали согласно Reed et al. [19].

Вкратце, 1/2-log разведения вируса проводили в 100 мкл DMEM, содержащего 1% бычьего сывороточного альбумина, трипсина TPCK (2 мкг / мл) и антибиотиков (вирусный разбавитель) в высокосвязывающих 96-луночных планшетах для полистирола ( Nunclon ™ Delta surface, Nunc, Дания). Свежие трипсинированные клетки MDCK доводили до 1,5 × 105 мл в вирусных разбавителях и в каждую лунку добавляли 100 мкл. Планшеты покрывали и инкубировали в течение 18-22 часов при 37 ° С и 5% СО2. Монослои промывали забуференным фосфатом физиологическим раствором (PBS) и фиксировали в холодном 80% ацетоне в PBS в течение 10 минут. Присутствие вирусного нуклеопротеина (NP) было обнаружено с помощью иммуноферментного анализа, связанного с ферментом (ELISA), с использованием моноклональных антител против вируса гриппа типа А (Millipore, Temecula, CA, USA) [20]. Скважины с показателем поглощения, превышающим 3 стандартных отклонения выше средней абсорбции лунок, содержащих только клетки MDCK, были оценены как положительные для роста вируса.

Сыворотку инактивировали при нагревании в течение 30 минут при 56 ° С и двухкратные серийные разведения проводили в 96-луночных планшетах для полистирола. Разведенные сыворотки смешивали с равным объемом вирусного разбавителя, содержащего вирус гриппа, при 100 TCID50 / 50 мкл. На каждую пластинку были включены четыре контрольных лунки вирусного разбавителя (VC) или вирусного разбавителя (CC). После 1-часовой инкубации при 37 ° С в увлажненной атмосфере с содержанием 5% СО2 в каждую лунку добавляли 100 мкл клеток MDCK при 1,5 × 105 мл. Планшеты инкубировали в течение 18-22 часов при 37 ° С и 5% СО2. Монослои промывали PBS и фиксировали в холодном 80% ацетоне в течение 10 минут. ELISA выполняли, как описано выше.

Объектами исследования были в основном мужчины (87,28%). Средний возраст птицевода составлял 25 лет (n = 330). Сопутствующих заболеваний не было. Кроме того, какой-либо участник не сообщил о вакцинации против сезонного и пандемического вируса гриппа H1N1 2009. В течение последних шести месяцев со дня сбора крови информация о гриппе не сообщалась учащимися.

TCID50 AI H9N2 составлял 105,25. Все 249 исходных сывороток были отрицательными, используя титр отсечки антител ≥40 антителом по HI-анализу. Результаты представлены с титрами ≥40, ≥80 и ≥160 антител. В целом 21 субъект (21/338 = 6,2%) были положительными либо с помощью анализов HI, либо с помощью MN с использованием титра титра антител ≥40. Восемь субъектов (8/21 = 38%) были общими положительными результатами в анализах HI и MN (таблица 1). В общей сложности 4,7%, 1,1% и 0,6% пациентов были положительными для антител против AI H9N2, используя титры с титрами ≥40, ≥80 и ≥160 антитела соответственно с использованием HI-анализа. Аналогично, 3,8%, 1,5% и 0,3% образцов были положительными с использованием титров с титрами ≥40, ≥80 и ≥160 антител соответственно, используя MN-анализ.

Профессиональное воздействие зараженной домашней птицы было важным фактором передачи вируса AI людям [21]. В настоящем исследовании наличие антител против AI H9N2 у работников птицеводства предполагает вероятную субклиническую инфекцию. В последнее время запросы не выявили респираторных заболеваний. Средняя возрастная группа индивидуумов, положительная по отношению к антителам против AI H9N2, составила 28,6 года, что указывает на восприимчивость молодых людей к AI H9N2. Это может быть связано с увеличением числа молодых предметов в исследовании. Спорадические случаи инфицирования человека AI H9N2 обычно присутствуют с относительно мягкими симптомами у людей [8], [22], [23]. Инфекции человека с AI H9N2 зарегистрированы в Китае, Гонконге и Вьетнаме [8], [11], [22] — [24]. Недавно в Бангладеш сообщалось о человеческом случае подтвержденной инфекции H9N2, когда пациент принимал участие в обработке мертвой курицы, промывании и разрезании мяса в доме до начала гриппоподобного заболевания [1]. Поэтому в текущем сценарии обращения AI H9N2 в Индии срочно требуется наблюдение за птицами в птицеводческих хозяйствах и особенно забирателям в Индии для отслеживания вирусных инфекций AI от домашней птицы.

Филогенетический анализ показал, что изоляты H9N2 человека в период с 1997 по 2009 год относятся к линиям G1 и Y280 [25]. Вирус AI H9N2, выделенный из Индии, принадлежал к G1-подобной линии H9N2 [26]. Вирус AI H9N2 остается пандемической проблемой для людей, поскольку этот вирус демонстрирует высокий уровень генетической пластичности, проявляя обширную эволюцию. Эксперименты с реассортантным штаммом показали, что благоприятные мутации, заменяющие другие аминокислоты лейцином в положении аминокислоты 226, показывают сродство к рецепторам человека (2,6 сиаловая кислота) и способны инфицировать хорьков и эффективно передавать вирус [27], [28] , Поэтому эпизоды вируса H9N2 у людей могут создать возможности для повторного использования с циркулирующими человеческими вирусами и возможность генезиса новых штаммов гриппа с пандемическим потенциалом. Таким образом, наблюдение за ИИ и характеристика вируса необходимы для понимания характеристик низкопатогенных вирусов ИИ.

В качестве контрольных значений отсечки антител для анализов HI или MN недоступны для обнаружения антител у людей, результаты сообщались с обрезанными шинами ≥40, а также титрами ≥80 и ≥160 антител с помощью анализов HI и MN. Индия сообщила о вспышках высокопатогенного птичьего гриппа (HPAI) H5N1 у домашней птицы с 2006 года. Свидетельства AI (H9N2) на рынке птицы могут предоставить возможность для человеческих инфекций и возможность реассортации с существующими вирусами AI домашней птицы, включая вирус HPAI H5N1. Было обнаружено, что регулярная очистка и дезинфекция рынков влажной домашней птицы помогает предотвратить цепь передачи вирусов AI в Индонезии [29]. Такие попытки также помогли бы Индии сократить распространение вирусов AI на рынках влажной птицы и воздействии на людей. Ограничение этого исследования заключается в том, что обобщение не может быть выполнено из-за меньшего количества выборок. Таким образом, это исследование не позволяет сопоставлять показатель распространенности на рынках по сравнению с фермами или соотношение распространенности внутри сайтов по сравнению с сайтами. Настоящее экспериментальное исследование показало низкую распространенность антител против вируса AI H9N2, что сопоставимо с данными исследований из Юго-Восточной Азии. В Индии срочно требуются дальнейшие вирусологические и серологические исследования у работников птицеводства для мониторинга инфекций человека.

Мы благодарим Prasad More, MR Khude, SK Waghmare, JPN Babu за полевые работы и Prashant Shinde за поддержку в лабораторной работе, д-р Shyam Dhawan, директор премии Chick Feeds Pvt. Ltd. и Dr. Nilesh Raut для организации полевых работ.

Конкурирующие интересы: авторы заявили, что конкурирующих интересов не существует.

Финансирование: Финансовая поддержка индийского совета медицинских исследований, Индия. Финансисты не играли никакой роли в разработке исследований, сборе и анализе данных, решении опубликовать или подготовить рукопись.