Ревматоидный артрит и моноциты



Изучалась цитохимическая активность моноцитов крови у больных серопозитивным ревматоидным артритом (РА). В динамике исследовались следующие ферменты: сукцинатдегидрогеназа (СДГ), лактатдегидрогеназа (ЛДГ), глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа (Г-6-ФДГ). Показано, что активность вышеуказанных ферментов у больных серопозитивным РА до лечения превышала норму, а после лечения имела тенденцию к нормализации.

Ключевые слова: ревматоидный артрит, ревматоидный фактор, моноциты, цитохимия, сукцинатдегидрогеназа, лактатдегидрогеназа, глюкозо-6- фосфатдегидрогеназа

Ревматоидный артрит (РА), несмотря на достигнутый прогресс в изучении и терапии, относится к одной из ключевых проблем современной ревматологии [8, 18]. В патогенезе РА важное место занимают иммунные нарушения. При РА обнаружен широкий спектр аутоантител, важнейшими из которых являются ревматоидные факторы, представляющие собой антитела к Fc-фрагменту агрегированного IgG человека. При серопозитивном варианте РА (при повышении уровня изотипа IgG-РФ) чаще встречаются системные проявления (васкулит, поражение слизистых, сердечно-сосудистой системы, ревматоидные узлы, синдром Фелти), выше уровень протеолитических ферментов сыворотки крови [14]. Определено, что развитие серологических вариантов РА определяется иммунными механизмами [17, 18]. Антитела способны циркулировать не только в крови, но и накапливаться в синовиальной оболочке, активировать комплемент в синовиальной жидкости. Макрофаги и нейтрофилы, обильно инфильтрирующие синовиальную оболочку сустава, поглощают РФ, что стимулирует образование цитокинов и высвобождение протеолитических ферментов, усиливающих воспаление. РФ является одним из прогностических маркёров деструктивного поражения суставов [2].

Снижение титров РФ сопровождается клиническим улучшением [5]. Одним из перспективных направлений, позволяющих охарактеризовать нарушения реактивности иммунной системы, является изучение метаболизма клеток иммунной системы, в частности моноцитов периферической крови.

Общеизвестно, что во 2 фазу иммунного ответа в лимфоцитах и клетках фагоцитарного ряда происходит резкое изменение активности внутриклеточных энзимов, и лишь через 2–3 недели происходит образование плазматических клеток, которые и продуцируют АТ [4]. Таким образом, изучение активности внутриклеточных ферментов даёт возможность прогнозировать иммунные нарушения и корректировать терапию, не дожидаясь активного антителогенеза.

Это становится возможным благодаря цитохимическому анализу клеток крови. Цитохимия — раздел цитологии, изучающий биохимическими методами строение и функции клеток, внутриклеточных структур и продуктов их жизнедеятельности [16]. В отличие от обычных биохимических исследований, при которых активность фермента (щелочной фосфатазы, ЛДГ и др.) характеризуется только средними цифровыми значениями, цитохимический анализ предусматривает определение активности фермента в целой клеточной популяции.

Изучению цитохимической активности лимфоцитов периферической крови уделено достаточно внимания в многочисленных клинических исследованиях [4, 9, 10, 11, 12].

Цитохимическая активности моноцитов крови, которые при РА вносят огромный вклад в поддержании воспалительной реакции, предмет изучения единичных авторов [3, 4], что подчёркивает актуальность темы.

Цель исследования. Оценить значение изменения метаболической активности моноцитов крови у пациентов с серопозитивным РА в динамике заболевания.

Материалы иметоды исследования.

В исследование были включены 52 человека с диагнозом серопозитивный ревматоидный артрит в возрасте от 27 до 65 лет. На момент исследования больные находились на стационарном лечении в ревматологическом отделении ГБУЗ АО «Александро-Мариинская областная клиническая больница». Критериями включения в исследование являлись: наличие диагноза «серопозитивный ревматоидный артрит», возраст от 27 до 65 лет. Критериями исключения служили: острые и хронические воспалительные заболевания в стадии обострения, заболевания системы крови, острые бактериальные и вирусные инфекции, злокачественные новообразования, возраст старше 65 лет.

Было обследовано 52 пациента с серопозитивным ревматоидным артритом, из которых 45 женщин (86,53 %) и 7 мужчин (13,46 %) в возрасте от 27 до 65 лет. Средний возраст на момент исследования 54 лет (мин. 27 лет, макс. 65лет). Средняя длительность заболевания составила 11,75 лет. Из 52 пациентов 20 (38,46 %) при поступлении в стационар уже находились на базисной терапии цитостатиками (метотрексат, лефлюнамид или сульфосалазин), 32 пациента (61,53 %) поступили в стационар, не получая цитостатическую терапию. Контрольную группу составили 35 практически здоровых лиц- доноры станции переливания крови.

Среди пациентов, находившихся под наблюдением, 3 (высокую) степень активности имели 36 пациентов (69,23 %), 2 (умеренную) степень активности- 16 пациентов (30,76 %). Поздняя стадия серопозитивного РА диагностирована у 32 пациентов (61,53 %), развёрнутая — 18 (34,61 %), ранняя — 2 (3,84 %).

Рентгенологическая стадия поражения суставов по Steinbгоскеr: у 3 пациентов (5,76 %) — I стадия, у 10 (19,23 %)- II, у 23 (44,23)- III, у 16 (30,76 %)- IV. У 17 пациентов отмечалось нарушение функции суставов (НФС) II степени, у 35 — III степени.

Установлено, что у 40 пациентов (76,92 %) имелись системные проявления РА: ревматоидные узелки выявлены у 36,53 %, анемия и/или тромбоцитоз — у 50 %, амиотрофия — у 9,61 %, сухой синдром у 3,84 % пациентов с серопозитивным РА. Все больные получали следующую терапию: НПВС, ГКС системно, цитостатики.

У всех больных определялась ферментативная активность моноцитов. Выделение моноцитов проводили по методике И. С. Фрейдлин [15].

В моноцитах исследовали следующие группы ферментов:

1) сукцинатдегидрогеназу (СДГ), отражающую цикл Кребса

2) лактатдегидрогеназу (ЛДГ), отражающую анаэробный гликолиз

3) глюкозо-6-фосфатдегидрогеназу (Г-6-ФДГ), отражающую активность пентозо-фосфатного шунта [1].

Оценку результатов цитохимических реакций проводили полуколичественным методом Kaplow [6] с определением среднего цитохимического показателя (СЦП).

Математическая обработка полученных цитохимических данных проводилась на персональном компьютере в программе Статистика 7.

Результаты исследования иих обсуждение.

Цитохимический анализ проводился в динамике: на момент поступления в стационар, т. е. до специфической терапии, и на момент выписки из стационара (после курса лечения).

При поступлении в стационар средний цитохимический показатель активности СДГ составлял 70,760,01 у.е. (норма СДГ 20,020,01 у.е.), что превышало норму в 3,5 раза. Активность ЛДГ при поступлении у больных серопозитивным ревматоидным артритом превышала таковую в норме в 6,2 раз и составила 92,150,01 у.е. (норма ЛДГ 15,020,02 у.е.). СЦП активности Г-6-ФДГ составил 91,010,01 у.е. при норме 15,020,02 у.е., что превышало норму в 6,1 раз.

При выписке из стационара после курса лечения, отмечалось снижение активности СДГ (57,390,02 у. е.). Активность ЛДГ незначительно снизилась по сравнению с таковой при поступлении — 87,120,01 у. е. Активность Г-6-ФДГ также имела тенденцию к снижению и составила 30,040,01 у.е.

Несмотря на очевидную тенденцию к снижению активности клеточного метаболизма в моноцитах крови больных РА, полной нормализации ферментативной активности не происходило.

Таким образом, у больных с серопозитивным ревматоидным артритом были выявлены значительные изменения активности исследуемых ферментов в моноцитах периферической крови по сравнению с таковой в группе здоровых доноров. Отмечалось повышение активности всех исследуемых ферментов в моноцитах больных с серопозитивным РА до лечения. После лечения у обследуемых активность ферментов не достигала нормальных значений, но снижалась по сравнению с исходными показателями.

Т. к. при серопозитивном РА выявлены изменения функции мононуклеарных фагоцитов, определение активности энзимов в этих клетках крови может быть использовано для прогнозирования иммунологических нарушений.

Общеизвестно, что базисные цитостатические препараты, в частности те, которые принимала наша группа пациентов, способны накапливаться в клетках ретикулоэндотелиальной системы. Существует множество работ, подтверждающих влияние этой группы препаратов на процессы фагоцитоза и презентации антигенов [7, 19]. Поэтому очевидно, что у пациентов с серопозитивным ревматоидным артритом, имеющих нарушение функции моноцитов, что подтверждает наше исследование, цитостатики должны оказать наибольший эффект. Это положение закономерно и в некоторых более ранних исследованиях [5, 13].

Таким образом, при РА выявлены изменения функции мононуклеарных фагоцитов, тесно связанные с иммунологическими показателями. Исследование функциональной активности моноцитов позволит расширить наши представления о патогенезе РА, рассматривать полученные данные как дополнительный метаболический маркёр серопозитивного РА, поможет прогнозировать обострение заболевания и вовремя корректировать лечебную тактику.

Литература:

1. Буеверов А. О. Апоптоз лимфоцитов и гранулоцитов периферической крови при хронических ИБУ- и ИСУ-инфекциях / А. О. Буеверов, Е. В. Тихонина, Е. Ю. Москалева и др. // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. — 2010. — № 6. — С.33–36.
2. Гусева И. А., Демидова Н. В., Сорока Н. Е. и др. Иммуногенетические аспекты раннего ревматоидного артрита // Вестник Российской академии медицинских наук. — 2013. — № 4. — С. 36–43.
3. Заводовский Б. В. Клинико-патогенетическое значение исследования метаболизма иммунокомпетентных клеток периферической крови при воспалительных ревматических заболеваниях: дис. …докт. мед. наук:14.00.39 / Б. В. Заводовский. — Волгоград, 2004. — 322 с.
4. Зборовский А. Б.,Заводовский Б. В.,Рвачев А. В. / Клинико- патогенетическое значение взаимосвязи между гистохимическими показателями системы крови и ревматоидным фактором у больных ревматоидным артритом // Научно-практическая ревматология. — 2001. — № 2. — С. 8–13.
5. Зборовский А. Б., Сивордова Л. Е., Деревянко Л. И., и др. / Эффективность Д-пеницилламина и метотрексата при лечении ревматоидного артрита в зависимости от уровня ревматоидных факторов разных классов. // Терапевтический архив. — 1999. — № 1. — С. 60–63.
6. Лабораторные методы исследования в клинике: Справочник / Под ред. В. В. Меньшикова. — М.: Медицина, 1987. — 368 с.
7. Литвицкий П. Ф., Синельникова Т. Г. / Врождённый иммунитет: механизмы реализации и патологические синдромы. Часть 3. // Вопросы современной педиатрии. — 2009. Т. 8, № 3. — С. 54–65.
8. Насонова В. А., Фоломеева О. М., Эрдес Ш. Ф. Ревматические заболевания в Российской Федерации в начале XXI века глазами статистики // Терапевтический архив. — 2009. — № 6. — С.5–10.
9. Нестерова И. В. Диагностика и коррекция иммунодефицитов по системе нейтрофильных гранулоцитов в эксперименте и клинике // 1-й Всесоюзный иммунологический съезд: тезисы докл. — М., 2009. — С. 342.
10. Петрова А. В., Потапов А. С., Семенова Г. Ф. и др. Особенности энергообмена лимфоцитов крови у детей с хроническим запором // Материалы съезда научного общества гастроэнтерологов. — М., 2005. — С. 476–477.
11. Писарева И. В., Карасева О. В., Рошаль JI.M. и др. / Цитохимическая оценка течения раннего послеоперационного периода при аппендикулярном перитоните у детей // Вопросы современной педиатрии. — 2007. Т. 6, № 3. — С. 28–31.
12. Савченко А. А., Гринштейн Ю. И., Потапова М. В. / Особенности иммунологического состояния и уровней активности НАД(Ф)-зависимых дегидрогеназ лимфоцитов у серонегативных и серопозитивных больных ревматоидным артритом // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). — 2012. Т. 109, № 2. — С. 57–61.
13. Сейсеибаев А. Ш., Немцов Б. Ф., Алибекова Р. И., Овсянникова Р. С. / Клиническое отражение иммунологической неоднородности ревматоидного артрита. // Ревматология. — 1987. — № 1. — С. 12–17.
14. Сигидин Я. А., Гусева Н. Г., Иванова М. М. Диффузные болезни соединительной ткани (Системные ревматические заболевания): Руководство для врачей. — М.: Медицина, 2004. — 640 с.

15. Тотолян А. А. Клетки иммунной системы: учебное пособие / А. А. Тотолян, И. С. Фрейдлин. — СПб.: Наука, 2000. — 231 с.

16. Фрейдлин И. С. Клетки иммунной системы: учебное пособие / А. А. Тотолян, И. С. Фрейдлин. — СПб.: Наука, 2001. Т.3–5.— 390 с.

17. Araujo J, Zocher M, Wallace K., et al. Increased rheumatoid factor interference observed during im-munogenicity assessment of an Fc-engineered therapeutic antibody // J. Pharm. Biomed. Anal. — 2011. — Vol. 55. № 5. — P1041–1049.
18. Barra L., Pope J., Bessette L., et al. Lack of seroconversion of rheumatoid factor and anti-cyclic citrullinated peptide in patients with early inflammatory arthritis: a systematic literature review. // Rheumatology (Oxford). — 2011. — Vol. 50. № 2. -P.311–316.
19. Choy Е., Panayi G. Mechanisms of action of second line agents and choice of drugs in combination therapy, Clin. Exp. Rheumatol., 1999, 17, 6, suppl. 18, 20–28.